一、潔凈室（區）的概念

美國航空業的陀螺儀制造過程中最先提出了生產環境的潔凈要求，為消除空氣中的塵埃粒子對航空儀器的齒輪、軸承的污染。降低返工率，提高使用壽命。

1.潔凈區定義：

2.潔凈區的分類：

按照氣流流型，可分為單向流潔凈室和非單向流潔凈室。

單向流潔凈室

非單向流潔凈室

3.適用的產品：

1.適用于通過最終滅菌方法、通過無菌加工技術使產品無任何存活微生物的醫療器械及體外診斷試劑產品的生產，如血管內支架、骨科植入物等。

2.適用于需要控制初始污染菌的醫療器械品種，如透析液（粉）等。

3.與產品直接接觸的單包裝。

4.構成：

生產用房：與生產產品工藝流程相對應的功能間，如注塑間、干燥間等。

檢驗用房：與檢驗有關的功能間，如陽性對照間、無菌檢驗間、微生物限度間等。

輔助功能用房：為生產服務的輔助功能間，如洗衣間、潔具間、鏈接各功能間的緩沖過濾通道。

二、潔凈室（區）檢測標準

引用英制單位（100級、10 000級、100 000級、300 000級）的標準有：

GB 50457-2008《醫藥工業潔凈廠房設計規范》

GB/T 16292-2010《醫藥工業潔凈室(區)懸浮粒子的測試方法》

GB/T 16293-2010《醫藥工業潔凈室(區)浮游菌的測試方法》

GB/T 16294-2010《醫藥工業潔凈室(區)沉降菌的測試方法》

YY 0033-2000《無菌醫療器具生產管理規范》等

引用ISO單位（1~9級）的標準有：

GB 50073-2013《潔凈廠房設計規范》

GB 50591-2010《潔凈室施工及驗收規范》等

無菌醫療器具潔凈室（區）環境要求及監測一般參照下表進行

檢測方向：

三、潔凈室（區）的驗證

1.溫度

潔凈區空調系統不僅有多層凈化空氣的作用，還具有調節系統溫度的能力。微生物在溫度、濕度等條件適宜的情況下會不斷地生長和繁殖。

要求：無特殊要求時（18~28）℃。

方法標準：

JGJ 71-1990；

GB 50591-2010《潔凈室施工及驗收規范》

檢測點為房間中心一點，應在溫度讀數穩定后再記錄。

2.濕度

保持潔凈區空氣適宜的濕度不僅能夠保證工作人員的 舒適度，更能控制微生物的存活率，保證產品質量。

要求：（45～65）%

注意：

某些生產車間會根據產品特殊的生產工藝，對濕度有特殊的要求。例如某些IVD的一些特殊生產工藝環節要求空氣濕度盡量干燥，達到30%以下。

方法標準：

JGJ 71-1990；

GB 50591-2010《潔凈室施工及驗收規范》

測量儀器的選擇：

溫濕度測量儀。其中濕度測量的量程（1～100）%， 分辨率0.1%，測量不確定度±2.5%。

3.氣流組織形式與換氣次數#p#分頁標題#e#

氣流組織：是指對氣流流向和均勻度按一定要求進行組織的空氣流動狀態與分布。

單向流（百級）：沿單一方向呈平行流線并且與氣流方向垂直的斷面上風速均勻的氣流。

非單向流（亂流）：其原理是靠潔凈送風氣流擴散、混合、不斷稀釋室內空氣，把室內污染逐漸排出，達到平衡。

潔凈室內各項指標的維持和調節都是通過換氣來完成的，換氣性能與其他所有項目都聯系緊密。合理的換氣次數、風速、氣流組織形式是保證潔凈室性能的前提條件。

方法標準：

JGJ 71-1990；

GB 50591-2010《潔凈室施工及驗收規范》

對于單向流潔凈室，可采用截面平均風速和截面積乘積的方法確定送 風量。

垂直單向流潔凈室的測定截面取距地面0.8m的無阻隔面（孔板、格柵除外）的水平截面，如有阻隔面，該測定截面應抬高至阻隔面之 上0.25m；

水平單向流潔凈室取距送風面0.5m的垂直于地面的截面；

截面上測點間距應不大于1m，一般取0.3m，測點數應不少于20個，均勻布置。

換氣次數的計算方法：換氣次數（次/h）= 風速（m/s）x 送風口面積（㎡）x 3600/ 房間體積（m）。

對于非單向流潔凈室，可采取風量罩法測量送風量并計算換氣次數。

換氣次數（次/h）= 房間送風量（m/h） / 房間體積（m）

4.靜壓差

保持合理的靜壓差是保證潔凈室及相關受控環境抵抗外界污染、防止內部污染和交叉污染的重要措施。穩定的壓差是保證潔凈室潔凈度等級的重要條件。

要求：

不同級別潔凈室及潔凈室與非潔凈室之間≥5Pa；潔凈室與室外大氣≥10Pa。

方法標準：

JGJ 71-1990；

GB 50591-2010《潔凈室施工及驗收規范》

5.潔凈度

影響潔凈度的因素眾多，可以分為內在因素和外在因素。內在因素包括 換氣次數、壓差、高效過濾器檢漏、潔凈區的密封性。外在因素包括人員、物品進出環境帶來的塵埃粒子影響和潔凈區日常清潔頻率。

方法標準：

GB 50591-2010《潔凈室施工及驗收規范》

測量儀器：

粒子計數器

采樣量：2.83L/min或28.3L/min。

粒徑：0.3μm、0.5μm、1.0μm、3.0μm、5.0μm、10.0μm。

測試要點：

1. 必須按照測試儀器的檢定周期，定期對測試儀器作檢定。應使用檢定合格，且在使用有效期內的儀器。

2. 測試儀器在未進入被測區域時，若必需，則先清潔表面，或在相應的潔 凈室內準備和存放（用保護罩或其它適當地外罩保護儀器）。

3. 在100級潔凈室內用紙時，上面應蒙上一張透明不沾塵的覆蓋物，在100 級潔凈室內不能用鉛筆和橡皮。

4. 使用測試儀器時應嚴格按照儀器說明書操作。

4.1 儀器開機，預熱至穩定后，方可按測試儀器說明書的規定對儀器進行校正，同時檢查采樣流量和等動力采樣頭。#p#分頁標題#e#

4.2 采樣管口置于采樣點采樣時，在計數趨于穩定后，開始連續讀數。

4.3 采樣管必須干凈，嚴禁滲漏。

4.4 采樣管的長度應根據儀器的允許長度。除另有規定外，長度不得大于1.5m。

4.5 粒子計數器采樣口和儀器工作位置宜處在同一氣壓和溫度下，以免產生測量偏差。

最少采樣點數目：

懸浮粒子測試最少采樣點數目可在以下兩種方法中任選一種：

① NL= √A

式中：NL — 最少采樣點；

√A — 潔凈室或潔凈區的面積，單位為平方米（m2）。

注：在單向流情況下，面積A可以認為是垂直于氣流方向上的橫截面積。

② 最少采樣點數目可從下表查到。

采樣點分布：

潔凈室采樣點的分布應均勻，避免在局部區域過于稀疏。在動態測試時，懸浮粒子采樣點的分布應根據產品的生產及工藝關鍵操作區域設置。

下列多點采樣的采樣點布置圖示可作參考：

采樣點的位置應滿足一下要求：

1.采樣點一般在離地0.8m高度的水平面上均勻布置。

2.采樣點多于5個時，也可以在離地面0.8~1.5m高度的區域內分層布置，但每層不少于5點。

采樣次數的限定：

對于任何潔凈室或局部空氣凈化區域，采樣點的數目不得少于2個，總采樣次數不得少于5次。每個采樣點的采樣次數可以多于1次，且不同采樣點的采樣次數可以不同。

最小采樣量：

采樣注意事項：

① 對于單向流潔凈室（區），粒子計數器的采樣管口應正對氣流方向；對于非單向流潔凈室（區），粒子計數 器的采樣管口宜向上。

② 布置采樣點時，應盡量避開回風口。

③ 采樣時，測試人員應在采樣口的下風側，并盡量少活動。

④ 采樣完畢后，宜對粒子計數器進行自凈。

⑤ 應采取一切措施防止采樣過程的污染。

結果計算：

懸浮粒子濃度的報出結果必須按照GB/T 16292-1996《醫藥工業潔凈室（區）懸浮粒子的測試方法》中的要求進行計算。報出值應為95%置信上限。

結果評定：

判斷懸浮粒子潔凈度級別應依據下述的兩個條件：

1.每個采樣點的平均粒子濃度必須不大于規定的級別界限。

2.全部采樣點的粒子濃度平均值的95%置信上限必須不大于規定的級別界限。

6.沉降菌

通過自然沉降收集在空氣中的生物粒子于培養基平皿，經若干時間，在適 宜的條件下讓其繁殖到可見的菌落進行計數，以平板培養基上的菌落數來 判定潔凈環境內的活微生物數，并以此來判斷潔凈室（區）的微生物濃度。

方法標準：

GB/T 16294-1996《醫藥工業潔凈室（區）沉降菌的測試方法》

培養皿：

一般采用90mm×15mm規格的培養皿培養基：NA、TSA、SDA、其他經驗證的培養基生化培養箱：控溫范圍：(0～60)℃并定期對培養箱進行溫度的校準。#p#分頁標題#e#

最少采樣點數目：

沉降菌測試最少采樣點數目可在以下兩種方法中任選一種：

① NL= √A

式中：NL — 最少采樣點；

√A — 潔凈室或潔凈區的面積，單位為平方米（m2）。

②查表

沉降菌的采樣點位置同懸浮粒子的布點。

測試步驟：

① 測試前培養皿表面必須嚴格消毒。

② 將已制備好的培養皿按采樣點布置圖逐個放置，然后從里到外逐個打開培養皿蓋，使培養基表面暴露在空氣中。

③ 靜態測試時，培養皿暴露時間為30min以上；動態測試時， 培養皿暴露時間為不大于4h。

④ 全部采樣結束后，將培養皿放置于(30～35)℃培養箱中培養至少48小時。

⑤ 每批培養基應有對照試驗，檢驗培養基本身是否污染。

可每批選定3只培養皿作對照培養。

菌落計數：

① 用肉眼對培養皿上所有的菌落直接計數、標記或在菌落計數器上點計，然后用5～10倍放大鏡檢查是否遺漏。

② 若平板上有2個或2個以上的菌落重疊，可分辨時仍以2個或2個以上菌落計數。

注意：

① 采樣前應仔細檢查每個培養皿的質量，如發現變質、破損或污染的應剔除。

② 由于細菌種類繁多差別較大，計數時一般在背面透射光下觀察。注意不要漏計培養皿邊緣生長的菌落，并須注意菌落與培養基沉淀物的區別， 必要時用顯微鏡鑒別。

最少培養皿數：

在滿足最少采樣點數目的同時，還應滿足最少培養皿數，見下表：

采樣時注意事項：

① 布置采樣點時，至少應盡量避開塵粒較集中的回風口。

② 采樣時，測試人員應站在采樣口的下風側，并盡量少走動。

③ 應采取一切措施防止采樣過程的污染和其他可能對樣本的污染。

④ 培養皿在用于檢驗時，為避免培養皿運輸或搬動過程造成的影響，宜同時進行對照試驗，每次或每個區域取一個對照 皿，與采樣皿同法操作但不需暴露采樣，然后與采樣后的培養 皿一起放入培養箱內培養，結果應無菌落生長。

⑤ 對培養基、培養條件及其他參數作詳細的記錄。

計算結果：

7.浮游菌

浮游菌的測試條件、狀態、最少采樣點數目、采樣點布點、菌落計數與沉降菌相同。

測試步驟：

1. 測試前儀器、培養皿表面必須嚴格消毒。

2. 采樣器進入被測房間前先用消毒房間的消毒劑滅菌，用 于100級潔凈室的采樣機宜預先放在被測房間內。

3. 用消毒劑擦凈培養皿的外表面。

4. 采樣前，先用消毒劑清洗采樣器的頂蓋、轉盤以及罩子 的內外面，采樣結束，再用消毒劑輕輕噴射罩子的內壁和轉 盤。

5. 采樣口及采樣管，使用前必須高溫滅菌。如用消毒劑對 采樣管的外壁及內壁進行消毒時，應將管中的殘留液倒掉并 晾干。#p#分頁標題#e#

6.采樣者應穿戴與被測潔凈區域相應的工作服，在轉盤上 放入或調換培養皿前，雙手用消毒劑消毒或戴無菌手套操作。

7. 采樣儀器經消毒后先不放入培養皿，開啟浮游菌采樣器， 使儀器中的殘余消毒劑蒸發，時間不少于5min，并檢查流量 并根據采樣量調整設定采樣時間。

8.關閉浮游菌采樣器，放入培養皿，蓋上蓋子。

9. 置采樣口于采樣點后，開啟浮游菌采樣器進行采樣。

10.全部采樣結束后，將培養皿倒置于30℃～35℃培養箱 中培養不少于48小時。

11. 每批培養基應有對照試驗，檢驗培養基本身是否污染。 可每批選定3只培養皿作對照培養。

最小采樣量：

注意事項：

① 對于單向流潔凈室（區）或送風口，采樣器采樣口朝向應正對氣流方向；對于非單向流潔凈室（區），采樣口向上。

② 布置采樣點時，至少應盡量避開塵粒較集中的回風口。

③ 采樣時，測試人員應站在采樣口的下風側，并盡量少走動。

④ 應采取一切措施防止采樣過程的污染和其他可能對樣本的污染。

⑤ 培養皿在用于檢驗時，為避免培養皿運輸或搬動過程造成的影響，宜同時進行對照試驗，每次或每個區域取一個對照皿，與采樣皿同法操作但不 需暴露采用，然后與采樣后的培養皿一起放入培養箱內培養，結果應無菌落生長。

結果判定：

① 每個測點的浮游菌平均濃度必須低于所選定評定標準中的界限。

② 在靜態測試時，若某測點的浮游菌平均濃度超過評定標準，則應重新采樣兩次，兩次測試結果均合 格才能判為符合。

8.照度

主要工作室一般照明的照度值為300lx。

輔助工作室的照度宜不低于150lx。

對照度有特殊需求的生產部位可設置局部照明。

9.噪聲

潔凈室內額空態噪聲級，非單向流潔凈室不應大于60dB，單向流、混合流潔凈室不應大于65dB。